The development and validation of the HPLC-DAD method for morphine content determination in novel liposomal formulation

Farhan, Fouzah Saleh ; فرحان, فوزه صالح (2021-08-19)

56 pages : Illustrations ; 30 cm

Thesis

The main question of the study: Is it possible to develop liposomal morphine forms for enhancing the morphine usage in medical practice, and to determine the encapsulation quantitatively and qualitatively in this liposomal morphine forms? - Is it possible to develop a new, stable, and applicable morphine liposomal formulations in combination with Menthol? - How efficient is the encapsulation of morphine in the developed liposomal formulations? - How efficient and valid is the HPLC-UV method of morphine in the developed liposomal formulations?

Specific objectives: - To develop a new, stable and applicable morphine liposomal formulations in combination with Menthol. - To detect the efficiency of encapsulation morphine in the developed liposomal formulations. - To prove the validation of the HPLC-UV method of morphine in the developed liposomal formulations.

Study samples: Samples of liposomal formulations, as well as samples of pure morphine. Study Methodology and Tools: The experimental scientific approach was used to address the study's questions and to achieve its goals. Two formulas were developed for Morphine _ Menthol liposomal. Liquid-liquid extraction (LLE) was used to extract morphine from the liposomal formulations. Ultimately, employing HPLC-UV, an analytical technique for sample analysis was developed and validated

Results: Two formulas were developed for Morphine _ Menthol liposomal using different DSPC:DPPC:Chol:Menthol (9.4:9.2:4.8:2) and DSPC:Chol:DMPC:Menthol (9.4:4.8:2.2:2) respectively, LLE method was conducted using dilution with the mobile phase, followed by the detection and quantification using HPLC-UV method. The method was validated with acceptable selectivity. Linearity was studied within the range of 0.1, 0.5, 1, 2.5, 5, 10, 25 and 50 μg/mL, and accuracy (Bias%) and precision (RSD%) were obtained for QC concentration 2, 20 and 40 μg/mL. The Linearity was acceptable R² = 0.99 within the linear range of 10.1-50 μg/mL (RSD%= 7.14%). The extraction recovery rates were very good within the range of 94-98%. LOD and LOQ were 0.01 and 0.1 μg/mL respectively. The obtained RSD% and bias values were acceptable at all concentrations for intra-day precision (RSD%; 3.468 to 9.658%) and bias (-10.600 to 14.100), as well as for the inter-Day precision (RSD%; 1.897 to 13.268%) and bias (-10.600 to 14.100%) in the studied matrices. The encapsulation ratios were in the range of 60-65%, 63.406% and 61.073% for the formula 1 and formula 2 respectively.

Recommendations: - Studying the formulation stability in biological conditions. - Studying the physiochemical and the pharmaceutical properties of the developed formulations.

التساؤل الرئيسي: هل يمكن تطوير طريقة تحضير مستحضرات ليبوزوم مورفين وطريقة تحليلية لتحليل المورفين في تلك المستحضرات باستخدام تقنية طريق جهاز HPLC/UV، ويتفرع من التساؤل الرئيس الأسئلة الفرعية التالية: ما مدى فاعلية طريقة تحضير مستحضرات الليبوزوم؟ وما مدى فاعلية طريقة تطوير الطريقة التحليلية وما مدى صلاحية الطريقة التحليلية المستخدمة؟

الهدف الرئيسي للرسالة: تهدف هذه الدراسة إلى تطوير طريقة تحضير مستحضرات ليبوزوم مورفين وطريقة تحليلية لتحليل المورفين في تلك المستحضرات باستخدام تقنية طريق جهاز HPLC/UV. الأهداف الفرعية تحقيق نسبة أكبر اندماج للمورفين في مستحضرات الليبوزوم، وتطوير طريقة كشف للمورفين باستخدام تقنية HPLC/UV، والتحقق من صلاحية الطريقة التحليلية المستخدمة ومدى فاعليتها عند تطبيقها بإدخال المنثول.

عينة الدراسة: اســــــتخدم محلول قياسي لعقار الدراسة المورفين، ومكونات أساسية في تركيب مستحضرات اليبوزوم منهج الدراسة وأدواتها: تم تطبيق المنهج العلمي التجريبي في الإجابة عن تساؤلات الدراسة وتحقيق أهدافها، وذلك بتحضير مستحضرات ليبوزوم مورفين وتطوير طريقة تحليلية لتحليل المورفين في تلك المستحضرات باستخدام تقنية طريق جهاز HPLC/UV

النتائج: تم تطوير صيغتين لمستحضر الليبوزوم لكل من المورفين _ المينتول باستخدام نسب مختلفة من كل من DSPC:DPPC:Chol:Menthol (9.4:9.2:4.8:2) و DSPC:Chol:DMPC:Menthol (9.4:4.8:2.2:2) على التوالي ، تم إجراء طريقة الاستخلاص LLE باستخدام التخفيف مع الطور المتحرك ، متبوعًا بالكشف والقياس الكمي باستخدام طريقة HPLC-UV. تم التحقق من صحة الطريقة مع انتقائية مقبولة. كانت الخطية مقبولة R² = 0.99 ضمن النطاق الخطي من 10.1-50 ميكروغرام / مل (RSD%= 7.14%). وكانت معدلات الاسترداد للاستخلاص جيدة جدًا في حدود 94-98٪. وكان LOD و LOQ 00.1 و 0.1 ميكروغرام / مل على التوالي. وكانت قيم الدقة (RSD%) التي تم الحصول عليها وقيم الصحة (التحيز) مقبولة في جميع التركيزات خلال اليوم الواحد (RSD٪ ؛ 3.468 إلى 9.658٪) والتحيز (-10.600 إلى 14.100%) ، وكذلك للدقة والصحة خلال أيام مختلفة (RSD٪ ؛ 1.897 إلى 13.268٪) والتحيز (-10.600 إلى 14.100٪) في المصفوفات المدروسة. وكانت نسب التغليف (الاندماج) للمورفين في نطاق 60-65٪ و 63.406٪ و 61.073٪ للصيغة 1 والصيغة 2 على التوالي.

التوصيات: - دراسة ثبات المستحضر في الظروف البيولوجية. - دراسة الخواص الفيزيوكيميائية والصيدلانية للتركيبات المطورة