مقارنة طرق الاشتقاق لتحليل بعض عقاقير فينثيل أمين المصممة لسلسلة 2C في عينات الدم باستخدام (GC-MS)

Abstract

التساؤل الرئيسي للدراسة ما هو أنسب عامل اشتقاق لتحليل كلا من (2C-B, 2C-D, 2C-E, 2C-P) في عينات الدم بواسطة (GC-MS)؟

التساؤل الفرعى للدراسة: - ما حديّ الكشف و التقدير لكل مركب باستخدام عوامل الاشتقاق ؟

الهدف الرئيسي للدراسة تقييم أنسب عامل اشتقاق لتحليل كلا من (2C-B, 2C-D, 2C-E, 2C-P) في عينات الدم بواسطة (GC-MS).

الهدف الفرعى للدراسة: - تقييم حديّ الكشف و التقدير لكل مركب باستخدام عوامل الاشتقاق.

عينة الدراسة اُستخدمت عينات الدم الفارغة (Blank) وعينات الدم الممزوجة بخليط مشتقات الفينثيل أمين.

منهج الدراسة وأدواتها تم تحضير العينات عن طريق ترسيب بروتينات الدم بواسطة الاسيتونيتريل، ومن ثمّ الاستخلاص بطريقة الطور الصلب (solid phase extration:SPE)، نوع Mixed Mode عند (pH3). تم اشتقاق المركبات بواسطة عوامل الاشتقاق: (Trifluoroacetic anhydride; TFAA)و (Pentafluoropropionic anhydride; PFPA) و (Heptafluorobutyric anhydride; HFBA) كلا على حِدى. تم استخدام (MDA-D5) كمعيار داخليّ للطريقة كما تم تحليل العينات باستخدام كروماتوجرافيا الغاز – مطياف الكتلة (GC-MS).

النتائج: مستوى الكشف (LOD) باستخدام عامل الاشتقاق (HFBA) و (PFPA) لكل من 2C-B و2C-E و 2C-P كان فى حدود (2.5ng/ml) وللعقار 2C-D كان فى حدود (5 ng/ml). وبالنسبة باستخدام عامل الاشتقاق (TFAA)، كان (LOD) لكل من 2C-B و2C-E و 2C-P و 2C-D فى حدود (10ng/ml). باستخدام عامل الاشتقاق (HFBA) و (PFPA)، كان (LOQ) لكل من 2C-B و2C-E فى حدود (5ng/ml) وللعقار 2C-P فى حدود و(2.5ng/ml) وللعقار 2C-D فى حدود (10 ng/ml). وباستخدام عامل الاشتقاق (TFAA)، كان (LOQ) لكل من 2C-B و2C-E و 2C-P و 2C-D فى حدود (25ng/ml). والعلاقة الخطّية للطريقة باستخدام عوامل الاشتقاق سالفة الذكر كانت محقّقة فـي المدى (5,10 and 25-1000 ng/ml). وتم التحقق من قبول منحنيات المعايرة عن طريق تقييم الصحة (%Bias) ومعامل الارتباط (r2) لهم. فكانت الصحة لجميع تراكيز منحنى المعايرة في المدى (17.1%) و (-16.6%)، ومعامل إرتباط (r2) يتراوح بين (0.99 -0.97). وهما في المدى المقبول للـ FDA.

التوصيات: - طرق الاشتقاق بواسطة (HFBA and PFPA) أكثر ملائمة لتحليل كل من (2C-B, 2C-D, 2C-E and 2C-P) فى عينات الدم لذا يوصى بتطبيق أيّ منها في معامل السموم الجنائية . - إجراء دراسة لتتحقق من صالحية (Method validation) الطريقه المقترحة لتقدير كلا من (2C-B, 2C-D, 2C-E and 2C-P) فى عينات الدم بواسطة(GC-MS/MS).

The main question of the study: What is the suitable derivatizing reagent for the GC-MS analysis of 2C-B, 2C-D,2C-E and 2C-P in blood samples?

Study sub-questions: - What is the limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) for each target analyte using the derivatization agents?

Main objective: The main objective of this study was to evaluate the suitable derivatizing reagent for the GC-MS analysis of 2C-B, 2C-D,2C-E and 2C-P in in blood samples.

Specific objectives: - To estimate the the limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) for each target analyte using the derivatization agents.

Samples: Blank and spiked human blood samples.

Study Methodology: Sample preparation required protein precipitation of blood sample with acetonitrile followed by Mixed mode solid-phase extraction (Mixed mode SPE) at pH 3.0. and then followed by derivatization with (heptafluorobutyric anhydride; HFBA), (pentafluoropropionic anhydride; PFPA) and (trifluoroacetic anhydride; TFAA). MDA-D3 was used as internal standard (IS). Sample was analyzed by GC-MS. For quantitative analysis, GC-MS was operated in selected ion monitoring (SIM) mode.

Results and Conclusions: In the case of HFBA and PFPA, the limit of detection (LOD) was (2.5 ng/mL) for 2C-B, 2C-E and 2C-P except 2C-D which was (5.0 ng/ml). In the case of TFAA, the LOD was (10 ng/mL) for all target compounds. The limit of quanification (LOQ) was (2.5 ng/ml) for 2C-P and (5.0 ng/mL) for 2C-B, 2C-E except 2C-D which was (10.0 ng/ml) by using HFBA and PFPA. The limit of quanification (LOQ) was (25 ng/mL) for for all target compounds by using TFAA. The calibration curves were linear within concentration range of 5, 10 and 25-1000 ng/mL for all compounds with correlation coefficient (0.99-0.97). The accuracy (%bias) for all calibration points was within the acceptable range.

Recommendations: - Derivatization by HFBA and PFPA is more suitable derivatizing reagents for GC-MS analysis of 2C-B, 2C-D,2C-E and 2C-P, therefore it is recommended to apply in forensic toxicology laboratories. - Validate a GC-MS/MS method for the analysis of 2C-B, 2C-D,2C-E and 2C-P in blood samples using HFBA or PFPA.