Stability of bk-2C-B in human blood samples using GC-MS

Abstract

The main question of the study: • Does bk-2C-B stability in human blood samples over a seven-day period under various storage conditions?

Study sub-questions: • what is the effect of temperature and storage time on the stability of bk-2C-B in human blood samples? • Do the accuracy and precision results before and after storage fulfil FDA acceptance criteria?

Main objective: • The major goal of this research is to assess the stability of bk-2C-B in human blood samples under various storage conditions.

Specific objectives: • To evaluate the effects of temperature and storage period in the presence or absence of ascorbic acid on the stability of bk-2C-B in human blood samples. • To compare the precision and accuracy of analyte before and after exposure to various storage conditions according to FDA.

Samples: Blank blood samples and spiked blank blood samples with bk-2C-B are used is the study sample preparation was involved protein precipitation with Acetone followed by liquid-liquid extraction (LLE). acetic anhydride (AA) was used for derivatization of bk-2C-B prior to GC-MS/MS analysis.

Results and Conclusion: The extraction procedure was performed using liquid – liquid extraction (LLE) after protein precipitation. The analyte was derivatized with Acetic Anhydride (AA) prior to GC-CI-MS/MS analysis. The calibration curve of compound was linear over the range 5 – 1000 ng/mL with correlation coefficient (r2) > 0.99. The intra and inter-assay accuracy (%Bias) for analyte was within (-8.95 – 8.63%) and (-3.35 – 4.95%) respectively. The intra and inter-assay precision (%RSD) for analyte was within (1.67 – 7.66%) and (3.56 – 5.85%) respectively. The stability results for a week of bk-2C-B in whole blood were within acceptance criteria of FDA at storage condition freezing (- 20 ̊C) and refrigerator (4 ̊C) with %Bias less than ± 15%, while stability at (- 20 ̊C) found slightly better than at (4 ̊C). The stability revealed that bk-2C-B was unstable at room temperature for a week with %Bias greater than ± 15%.

Recommendations: • Further study should be investigated for drug stability using different types of blood additives such as citrate, heparin and EDTA. • Determination of bk-2C-B in whole blood using GC-EI-MS/MS. • It is recommended for blood samples to be stored at freezing temperature for detection of cathinones derivatives or 2C-series drugs.

التساؤل الرئيسي للدراسة: ما مدى ثباتية bk-2C-B في عينات الدم عند ظروف حفظ العينات لمدة ٧ يوم؟

ويتفرع من التساؤل الرئيسي الأسئلة الفرعية التالية: • ما مدى تأثير درجة الحرارة، فترة التخزين ووجود / عدم و جود مادة حافظة على ثباتية bk-2C-B في الدم؟ • ما مدى قبول نتائج الصحة و الدقة للعقار قبل وبعد فترة التخزين وفقاً لمعايير FDA للتحليل الحيوى للعقاقير؟

الهدف الرئيسي: تهدف هذه الدراسة الى تقييم ثباتية bk-2C-B في عينات الدم عند ظروف حفظ العينات لمدة ٧ يوم.

ويتفرع منه الأهداف الفرعية التالية: • دراسة آثار درجة الحرارة وفترة التخزين في وجود أو عدم وجود حمض الأسكوربيك على ثبات bk-2C-B في عينات دم الآدمية. • التحقق من صحة نتائج الصحة والدقة للعقار قبل وبعد فترة التخزين و مقارنتها بمعايير FDA للتحليل الحيوى للعقاقير.

عينة الدراسة: تتمثل عينة الدراسة في الدم الآدمي النقي والخالي من وجود آية عقاقير طبية وتم مزجها bk-2C-B.

النتائج: تم استخلاص bk-2C-B بواسطة السائل-السائل (LLE) بعد ترسيب البروتين. ثم اشتقاقها باستخدام أنهيدريد الخليك (AA) قبل تحليلها عن طريق GC-CI-MS/MS . وكان منحنى المعايرة للمركب خطيًا على المدى 5-1000 ng/mL مع معامل الارتباط (r2)> 0.99 وكانت نتائج الدقة intra and inter-assay المعبر عنها بالانحراف المعياري النسبي المئوي(% RSD) ضمن ( - 8.63%8.95-) و(- 4.95% 3.35-) على التوالي. وكانت قيم الصحة intra and inter-assay المعبر عنها (% Bias) ضمن (1.67 – 7.66%) و (3.56 -5.85%) على التوالي ، وهذه النتائج ضمن القيم المقبولة بواسطة FDA في ظروف تخزين (- 20 ̊C) و (4 ̊C) بنسبة %Biasأقل من ± 15%، بينما الثباتية عند (- 20 ̊C) وجدت أفضل قليلاً من (4 ̊C) وأظهرت الدراسة أن bk-2C-B كان غير مستقر عند درجة حرارة الغرفة لمدة أسبوع مع %Bias أكبر من ± 15%

أهم التوصيات: • يوصى بإجراء مزيد من الدراسات لثباتية bk-2C-B باستخدام أنواع آخرى من الإضافات لدم مثل السترات والهيبارين وEDTA . • تقدير bk-2C-B في الدم الكامل باستخدام GC-EI-MS/MS . • يوصى بتخزين عينات الدم في درجة حرارة التجمد للكشف عن مشتقات الكاثينون أو المواد التي تحتوي على سلسلة 2C.