Characterization of hepatitis B virus intrahepatic covalently closed circular DNA and serum viral marker with acute and chronic HBV infection treated in Saudi patients

شبيطة, مي عمر توفيق ; Shubaita, Mai Omar ; الحبابي, فاضل حسن . مشرف رئيس ; موسى’ أماني عبد الحكيم . مشرف مساعد (2019-06-17)

رسالة (ماجستير)-جامعة نايف العربية للعلوم الأمنية، كلية علوم الأدلة الجنائية، قسم الأحياء الجنائية، تخصص الوراثة الجزئية،

67 ورقة : جداول

Thesis

Study population: This is a prospective study conducted include patient between 74 Saudi patients both six with age range 3-80 Y diagnosed with acute hepatitis B (AHB) or chronic hepatitis B infection (CHB) who admitted to King Saud Medical City (KSMC) from January 2008 to December 2018. All AHB and CHB patients will be categorized according to clinical and laboratory investigation findings including all CBH clinical pathogenesis such as immune-tolerant (IT) phase, immune-clearance (IC) phase, low-replicative (LR) phase, and HBeAg-negative (ENH) phase. The diagnosis criteria for acute and chronic hepatitis B will be performed according to the in-ternational guidelines. Study objectives: 1. To investigate the correlation between intrahepatic cccDNA and serum viral markers including Hepa-titis B surface antigen (HBsAg) and Hepatitis B virus DNA (HBV DNA) throughout natural phases of acute and chronic HBV infection among Saudi treated patients. 2. Investigate the correlation of covalently closed-circular DNA (cccDNA) with entecavir (ETV) and other Nucleoside Analogues (NAs) antiviral drugs. Study approach: This study was based on partially observational and practical experimental approach using the available mo-lecular genetics techniques in Riyadh regional laboratory. Result: 1. Biopsies from 74 patients diagnosed with CHB were tested for intrahepatic total cccDNA by real-time PCR. 2. Also another 30 CHB were used to measure extracellular HBV cccDNA, of majority of patients in im-mune-clearance (IC) phase, these patients showed high serum viral HBV DNA replication and high level of ALT (average 121 U/L). 3. The second group was in low-replicative (LR) phase, HBV DNA viral load is 335 IU/ml and showed normal ALT. 4. Finally, 3 patients were showed loss HBsAg indication for resolved infection (RI), HBV DNA not de-tected and normal ALT level. Among these patients four patients were under treatment with entecavir (ETV). Two of them had undetectable serum HBV DNA and normal ALT level and the other were posi-tive serum HBV DNA viral load average is 135IU/ml. 5. This study showed the intrahepatic cccDNA levels in patients with CHB inactive carriers with extremely low levels of cccDNA. We could not detect cccDNA in most of HBsAg negative and could detect cccDNA in blood of patients with CHB infection, mainly in patients with HBV DNA high viral load. For patients with CHB under entecavir therapy. 6. Our results showed that most patients under this therapy showed well response, over a treatment period treatment and the serum total HBV DNA reached to not detected level and can reduce the level of cccDNA in many patients. And two patients still showed low level of serum HBV DNA positive. Recommendations: 1. 1-Study the prevalence of cccDNA among those patients with standardized methods and validated pro-cedure is important. 2. 2-Requirement of additional out patients monitoring and further investigating of cccDNA a marker for intrahepatic infection, monitoring treatment response and determination of reactivation infection.

مجتمع الدراسة: تم الحصول على عينات انسجة كبد من أربع وسبعين مريض من الجنسين بأعمار تتراوح بين 3 الى 80 سنه من مدينة الملك سعود الطبية. أهداف الدراسة: 1. توصيف العلاقة بين cccDNA داخل الكبد وعلامات الفيروسية في الدم بما في ذلك HBsAg و HBV DNA من عدوى الفيروس الحادة والمزمنة بين المرضى السعوديين المعالجين. 2. التحقق من علاقة الحمض النووي الدائرية تساهميا (cccDNA) مع entecavir (ETV) ، lamivudine (LAM) ، tenofovir والأدوية المضادة للفيروسات الأخرى NAs. منهج الدراسة: هذه دراسة استطلاعية تم إجراؤها على مرضى يتراوح عددهم 74 مريضاً سعودياً مصابين بالتهاب الكبد الحاد B (AHB) أو عدوى التهاب الكبد B المزمن(CHB) الذين تم قبولهم في مدينة الملك سعود الطبية (KSMC) من يناير 2008 إلى ديسمبر.2018 تم تصنيف المرضى وفقا لنتائج التحاليل السريرية والمخبرية بما في ذلك جميع مسببات الأمراض السريرية CBH . كما تم تنفيذ تشخيص التهاب الكبد B الحاد والمزمن وفقا للمقاييس المتبعة طبيا. أهم النتائج: 1. تم اختبار الخزعات من 74 مريضا تم تشخيصهم بـ CHB لمعرفة مجموع cccDNA داخل الكبد بواسطة PCR في الوقت الحقيقي. 2. كما تم استخدام 30 CHB أخرى لقياس HCC HCCV خارج الخلية ، من غالبية المرضى في مرحلة تطهير المناعة (IC) ، أظهر هؤلاء المرضى عالية المصل HBV الحمض النووي الفيروسية النسخ المتماثل ومستوى عال من ALT (AV- erage121 U / L). 3. المجموعة الثانية كانت في مرحلة التكرار المنخفض (LR) ، حمولة فيروس HBV DNA هي 335 وحدة دولية / مل وتظهر ALT طبيعية. وأخيرا تم عرض 3 مرضى فقدان مؤشر HBsAg للعدوى التي تم حلها (RI)، 4. لم يتم اكتشاف HBV DNA ومستوى ALT الطبيعي. من بين هؤلاء المرضى كانوا أربعة مرضى تحت العلاج مع entecavir (ETV). اثنان منهم كان لا يمكن الكشف عنها الحمض النووي HBV في الدم ومستوى ALT الطبيعي والآخر كان متوسط الحمل الإيجابي HBV DNA الحمض النووي DNA هو 135IU / مل. 5. مستويات cccDNA داخل الكبد في المرضى الذين يعانون من ناقلات CHB الخاملة مع مستويات منخفضة للغاية من cccDNA. لم نتمكن من اكتشاف cccDNA في معظم HBsAg سالبة، ويمكننا اكتشاف cccDNA في دم المرضى الذين يعانون من عدوى CHB ، وبشكل رئيسي في المرضى الذين يعانون من حمولة HBV DNA عالية الفيروسية. للمرضى الذين يعانون من CHB تحت العلاج entecavir. 6. معظم المرضى المعالجون أظهروا استجابة جيدة، خلال فترة العلاج، ووصل إجمالي HBV DNA في المصل إلى مستوى غير مكتشف ويمكن أن يقلل من مستوى cccDNA في العديد من المرضى. اثنان من المرضى أظهروا انخفاض مستوى الحمض النووي HBV في الدم. توصيات الدراسة: 1- دراسة انتشار cccDNA بين هؤلاء المرضى مع أساليب موحدة وإجراءات التحقق من صحة التشخيص أمر مهم طبيا وعلاجيا. 2- مراقبة مرضى الالتهاب الكبدي ب وإجراء فحوص إضافية والتحقق لـ cccDNA كعلامة للعدوى داخل الكبد ومراقبة استجابة العلاج.